層析色譜柱是一種用于分離和純化化合物的色譜技術(shù)。它通常由一根固定相色譜柱和一個(gè)可移動(dòng)的流動(dòng)相色譜柱組成。在層析色譜柱中，固定相色譜柱通常由一系列不同直徑的顆粒組成，這些顆粒具有不同的分子量和孔隙率。流動(dòng)相色譜柱則通常由一系列具有不同極性和流速的溶劑組成，這些溶劑可以沖洗固定相色譜柱，并將不同的化合物從固定相色譜柱中分離出來(lái)。
 

　　化合物的吸附和解吸過(guò)程是基于范德華力和氫鍵作用。化合物分子在固定相色譜柱上的吸附是由于分子表面上的各種化學(xué)和物理性質(zhì)的差異，這些差異導(dǎo)致了分子在固定相色譜柱上的吸附能力不同。吸附作用可以導(dǎo)致化合物的電性、氫鍵和疏水性等性質(zhì)發(fā)生變化。而化合物在流動(dòng)相溶劑中的溶解度則取決于其分子量和化學(xué)結(jié)構(gòu)等因素。
 

　　流動(dòng)相溶劑可以通過(guò)沖洗固定相色譜柱來(lái)將化合物從固定相色譜柱中分離出來(lái)。這個(gè)過(guò)程類似于吸附色譜柱中的吸附過(guò)程，只是在這種情況下，分離過(guò)程是基于溶質(zhì)在固定相色譜柱上的吸附強(qiáng)度差異。流動(dòng)相溶劑的沖洗速度和流速可以調(diào)節(jié)，以便在不同的化合物之間實(shí)現(xiàn)分離效果。

 

　　層析色譜柱采用層析法，是一種以分配平衡為機(jī)理的分配方法。薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，待干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上，晾干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi)，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時(shí)，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。
 

　　層析色譜柱操作的幾大要點(diǎn)須知：
 

　　1.在濾紙條上端邊緣約1厘米的中央剪一小孔。
 

　　2.將濾紙條平放于潔凈的紙上，在距離濾紙下端1cm處用鉛筆輕畫一橫線，并在橫線的中央畫一直徑為2mm的小圓圈。
 

　　3.用毛細(xì)管吸取氨基酸混合液，在濾紙條下端的小圓圈內(nèi)點(diǎn)樣。
 

　　4.取干燥大試管，加入被水飽和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到試管壁上，將試管垂直固定。
 

　　5.在距濾紙條下端0.5cm處穿大頭針。從濾紙條上端小孔處穿棉線并左右分開，調(diào)節(jié)線的高度使濾紙垂直懸于試管內(nèi)且下湍浸入溶液0.5cm，注意勿使點(diǎn)樣點(diǎn)浸入溶液中，亦勿使濾紙條接觸試管壁。
 

　　6.此時(shí)即可看到溶劑向上移動(dòng)，溶劑升到一定高度時(shí)，小心將紙條取出，以鉛筆標(biāo)出溶劑上升的前沿。
 

　　7.將濾紙條兩端，用大頭針釘在小木框上，吹干后用噴霧器均勻地噴一層0.2%三酮乙醇溶液，然后再將濾紙條吹干，即可看到紙上顯出三色點(diǎn)，每個(gè)色點(diǎn)代表一種氨基酸。
 

　　8.分別測(cè)量并計(jì)算三種氨基酸的Rr，再根據(jù)教師供給的值確定此三個(gè)色點(diǎn)各為何種氨基酸。
 

　　9.留在試管內(nèi)的酚溶劑切勿棄去，塞緊塞子。